國共合作全面破裂后，在1927年8月中共中央緊急會議上，他提出“政權是由槍杆子中取得的”，即以革命武裝奪取政權的思想，並被選為中央政治局候補委員。會後，到湖南、江西邊界領導秋收起義。接着率起義部隊上井岡山，發動土地革命，創立第一個農村革命根據地。成為了革命期間里的偉大領袖人物。1928年，同朱德領導的起義部隊會師，成立工農革命軍。他任黨代表、前敵委員會書記，朱德任軍長。以他為主要代表的中國共產黨人，從中國的實際出發，在國民黨政權統治比較薄弱的農村發展武裝鬥爭，開創了以農村包圍城市、最後奪取城市和全國政權的道路。
1931年，中華蘇維埃共和國臨時政府在江西瑞金成立，被選為主席。1933年，被補選為中共中央政治局委員。從1930年底起，同朱德領導紅一方面軍戰勝了國民黨軍隊的多次“圍剿”。以王明為代表的“左”傾路線領導集團進入中央革命根據地以後，將毛澤東排斥於黨和紅軍的領導之外，他們執行不同的戰略和政策，導致第五次反“圍剿”戰爭失敗。1934年10月，參加紅一方面軍長征。長征途中，1935年1月中共中央政治局在貴州召開擴大會議，確立了以毛澤東為代表的新的中央領導。10月，中共中央和紅一方面軍到達陝北，結束長征。這次長征給了中國共產黨人留下了深刻的印象，人們念念不忘那些為了革命而獻出生命的人，不忘那些支持共產黨的各族同胞們。他們不惜把自家的糧食全都給了共產黨，把中國的未來、希望都交給共產黨來完成。抗日戰爭開始后，以他為首的中共中央堅持統一戰線中的獨立自主原則，努力發動群眾，開展敵後游擊戰爭，建立了許多大塊的抗日根據地。1945年，主持召開中共第七次全國代表大會，毛澤東思想在這次大會上被確定為中共的指導思想。他從七屆一中全會起至1976年逝世為止，一直擔任中共中央主席。
抗日戰爭勝利后，針對蔣介石企圖消滅共產黨及其武裝力量的現實，他提出“針鋒相對”的鬥爭方針。1945年8月赴重慶同蔣介石談判，表明中國共產黨爭取國內和平的願望。1946年夏蔣介石發動全面內戰後，毛澤東同朱德、周恩來領導中國人民解放軍進行積極防禦，集中優勢兵力，各個殲滅敵人。1947年3月至1948年3月，同周恩來、任弼時轉戰陝北，指揮西北戰場和全國的解放戰爭。1947年夏，中國人民解放軍從戰略防禦轉入戰略進攻，在以他為首的黨中央領導下，經過遼瀋、淮海、平津三大戰役和1949年4月渡長江以後的作戰，推翻了國民黨政府。
1949年10月1日，中華人民共和國建立，他當選為中央人民政府主席。同年10月，迫於美國軍隊攻入朝鮮民主主義人民共和國、威脅中國東北部的形勢，以他為首的中共中央決定進行抗美援朝戰爭。1952年，在他的領導下，開展了反對貪污、反對浪費、反對官僚主義的“三反”運動和反對行賄、反對偷稅漏稅、反對盜騙國家財產、反對偷工減料、反對盜竊經濟情報的“五反”運動。1954年，第一屆全國人民代表大會第一次會議通過了由他主持起草的《中華人民共和國憲法》，他在這次會議上當選為中華人民共和國第一任主席，任職到1959年。
毛澤東在他的晚年雖然犯了嚴重的錯誤，但是就他的一生來看，他對中國革命的不可爭論的功績遠大於他的過失，他的功績是第一位的，錯誤是第二位的，他仍然受到中國人民的崇敬。中國共產黨在他逝世5年以後，對他的全部革命活動和革命思想以中央委員會決議的形式作出了全面的評價。毛澤東思想作為馬克思 主義在中國的發展，仍然是中國共產黨的指導思想。
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