三排長陳喜在進駐南京路后，放鬆了警惕，受到資產階級“香風”的熏染，忘記了我軍艱苦樸素的革命傳統，還說班長趙大大黑不溜秋靠邊站。妻子春妮從鄉下來部隊探望他，他卻嫌棄妻子太土氣。新戰士童阿男不請假就與同學到國際飯店吃飯，連長批評了他，他一賭氣，留下一張字條，揚長而去。
班長趙大大怎麼也看不慣這大上海，鬧着要到有仗打的地方去。
另一方面，特務正在醞釀破壞行動。就在童阿男離開連隊，準備和他的同學林媛媛去南京投考軍政大學時，她姐姐童阿香卻遭到特務分子的謀害。幸虧路華、魯大成及時搭救，逮捕了特務阿七，阿香才轉危為安。通過這件事，戰士們認識到南京路上絕非“太平無事”。指導員路華因勢利導，請來老工人周德貴和童阿男的母親，講述了他們解放前的苦難遭遇及鬥爭經歷，激發了戰士們的革命鬥志。童阿男又決心聽黨的話，做毛主席的好戰士。陳喜也在指導員的耐心幫助下，認識到資產階級的毒害，看到了妻子春妮寫給指導員的信，更是悔恨不已。他要求組織上給他處分，決心痛改前非。
半年以後，特務老K和曲曼麗不甘心失敗，繼續策劃破壞活動。在上海人民舉行春節聯歡的時候，他們利用林媛媛的表哥、羅克文，將裝有炸彈的鮮花帶入慶祝會場。關鍵時刻，童阿男搶過將羅克文手中的鮮花，避免了爆炸事件。特務老K、曲曼麗也落入解放軍布下的天羅地網。
影片《霓虹燈下的哨兵》根據沈西蒙的話劇改編，原型是大家熟悉的“南京路上好八連”。影片將話劇中兩條並置的情節線作了調整，把對敵特鬥爭的線索處理為背景，將鏡頭主要對準部隊內部的思想鬥爭。將陳喜、童阿男、趙大大事件等多組矛盾衝突交織在一起，充分展示了主題。
《霓虹燈下的哨兵》是由現代話劇改編成的影片中比較成功的一部。這一方面得益於劇中多層面的矛盾設置。影片中的幾個有情趣、有特色的人物，如連長魯大成、三排長陳喜、班長趙大大、新戰士童阿男，尤其是春妮純樸真摯，她用畫外音讀出的寫給丈夫陳喜的信更是催人淚下，給觀眾留下深刻印象。
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